產(chǎn)品名稱：2×Fast Pfu Master Mix
中文名稱：2倍快速Pfu梅預(yù)混液

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品描述：本制品是將PCR反應(yīng)所需的Fast Pfu梅、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖夜以及優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，預(yù)先配制成2倍濃度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix專為擴(kuò)增克龍DNA片段優(yōu)化，高保真，錯(cuò)誤率僅為1.3×10-6。使用時(shí)只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，非常方便。較普通Pfu梅，2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高靈敏度、抗干擾強(qiáng)等特點(diǎn)，能獲得更理想的擴(kuò)增結(jié)果， 并大幅度縮短擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)間，非常適用于1-20kb長(zhǎng)片段的擴(kuò)增。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

高保真：具有同Pfu梅相同的保真度，為普通Taq酶的50倍。

靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出特定基因片段。

快速高效：Fast Pfu擴(kuò)增速度為普通Pfu梅的數(shù)倍，72℃保溫30 秒可延伸1kb以上，可在較短時(shí)間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的PCR產(chǎn)物（圖例一）。

快捷：PCR反應(yīng)所必需試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系配制。

產(chǎn)品用途：用于要求保真度比較高，擴(kuò)增長(zhǎng)度較長(zhǎng)的PCR反應(yīng)，包括克龍PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成等。

使用建議：（Fast Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端，無(wú)3′端"A" 突出，除使用環(huán)凱PCR一步定向克龍?jiān)噭┖校–at. No: HKNR001） 外，其它PCR產(chǎn)物的克龍方案有：）

1)PCR前引物進(jìn)行5′端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物麟酸化處理后再直接克龍于平滑末端的載體中。

2)將產(chǎn)物3′末端加A后再與T載體連接。

3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加引物的長(zhǎng)度， 理想的引物長(zhǎng)度為20-30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配制反應(yīng)體系。

應(yīng)用實(shí)例：圖例一）50μL 擴(kuò)增體系中，λDNA 為模板， 擴(kuò)增 1kb~20kb 片段。

泳道 M：λ/Hind III DNAMarker；

泳道 1：1kb；

泳道 2：2kb；

泳 道 3：4kb；

泳 道 4：6kb；

泳道 5：8kb；

泳道 6：10kb；

泳道 7：12kb；

泳道 8：20kb。

保存溫度：-20℃。

產(chǎn)品包裝（A 包裝）：

質(zhì)量保證：經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶殘留；qPCR方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌DNA殘留；能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

常用反應(yīng)體系（50μL）：

常用PCR 循環(huán)：

注意事項(xiàng)：

1)需溶解*后使用，防止離子濃度不均勻。

2)對(duì)高GC含量模板，建議將變性溫度提高到98℃。

3)對(duì)于高GC模板，建議配套使用PCR萬(wàn)能增強(qiáng)劑 I（Cat.No: HKE055）或者添加終濃度為5%-8% DMSO。